实验前准备
所有试剂恢复至室温（18-25°C），样本离心去除沉淀。
标准操作流程
- 包被：将捕获抗体稀释至工作浓度，100μL/孔，4°C过夜
- 封闭：弃包被液，加200μL封闭液，室温孵育1小时
- 加样：弃封闭液，加入标准品和待测样本，100μL/孔，室温孵育2小时
- 洗涤：PBST洗板3-5次，每次300μL/孔，彻底拍干
- 加检测抗体：100μL/孔，室温孵育1小时
- 显色：加TMB底物，100μL/孔，避光显色15-30分钟
- 终止：加终止液50μL/孔
- 读数：450nm波长读取OD值
常见问题排查
| 问题 | 可能原因 | 解决方案 |
|---|---|---|
| 背景值过高 | 洗涤不充分 | 增加洗涤次数和浸泡时间 |
| 标准曲线异常 | 标准品稀释错误 | 重新配制标准品 |