PCR常见问题及解决方案

PCR产物无扩增

可能原因及解决方案：

• 模板降解 → 重新提取DNA/RNA
• 引物设计不当 → 重新设计引物，检查Tm值和GC含量
• 退火温度过高 → 降低退火温度2-5°C
• 聚合酶失活 → 更换新的聚合酶

出现非特异性条带

提高退火温度，减少引物用量，优化Mg²⁺浓度，使用热启动聚合酶。

引物二聚体

减少引物用量，提高退火温度，重新设计引物避免3'端互补序列。